Genoteca

Es una colección de clones cada uno de los cuales contiene un vector al que se le ha insertado un fragmento de ADN derivado del ADN o el ARN totales de la célula o tejido. Con el tamaño suficiente, la colección de clones debería contener, todas las secuencias existentes en la fuente original de ADN, es decir, debería contener muestras de todo el ADN del organismo. Es posible buscar en la genoteca un clon con un fragmento de ADN de interés mediante métodos sensibles de detección capaces de detectar dicho fragmento entre millones de clones diferentes.

Usos que se le pueden dar a una genoteca:
- El aislamiento de secuencias y genes: punto de partida para el estudio molecular.
- La conservación del genoma: la excepcionalidad de una muestra biológica aconseja conservar su material genético (restos arqueológicos, especies en extinción, individuos con patologías únicas).

- Estudio de la secuencia genómica: conocer la secuencia completa de un genoma implica su clonación previa.

 Las genotecas permiten disponer en cualquier momento de secuencias de ADN de posible interés biomédico.

Bibliografia:
http://es.wikipedia.org/wiki/Genoteca
http://uvigen.fcien.edu.uy/utem/herramgen/03_clonacion.htm
http://www.medmol.es/tecnicas/32/

ADN recombinante en la naturaleza

La tecnología del ADN recombinante permite el aislamiento de un gen de un organismo para introducirlo en otro. Entre sus aplicaciones se encuentra la producción de grandes cantidades de la proteína codificada por dicho gen, como por ejemplo proteínas humanas en cantidad suficiente para que puedan ser utilizadas como fármacos. Las proteínas obtenidas por esta técnica se denominan proteínas recombinantes

La tecnología de ADN recombinante se desarrolla en tres pasos: el aislamiento del gen de interés, la clonación y expresión de dicho gen, y la producción a gran escala dela proteína codificada por el gen. Cada uno de estos procesos precisa de unas herramientas la mayoría de las cuales son ofrecidas por la propia naturaleza.

Referencia:
http://es.scribd.com/doc/46796018/ADN-Recombinante

ADN recombinante en Diabetes

La ingeniería genética ha permitido tratar a los pacientes con diabetes, mediante la utilización de ADN recombinante, este mecanismo permite que la insulina humana pueda producirse en otros organismos y así poder utilizarla para el tratamiento de pacientes.

1: aislar el gen.

2: preparar el ADN diana.

3: insertar el gen de la insulina en el plásmido para su recombinación.

4: insertar el plásmido en la célula que puede ser una bacteria.

5: el plásmido se multiplica, cuando la bacteria se reproduce también contiene el gen de insulina.

6: las moléculas de insulina humana producidas por las bacterias deben ser purificadas.

7: muchas personas con diabetes se tratan con insulina producida por bacterias que es geneticamente compatible con su cuerpo..

Vocabulario:

Plásmidos: son moléculas de ADN extracromosómico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADNcromosómico. 

Referencia:

http://www.iptv.org/exploremore/ge/what/insulin.cfm

Mecanismos moleculares del daño microvascular de la diabetes mellitus.

Las complicaciones vasculares de la diabetes mellitus están representadas por la macroangiopatía y la microangiopatía. La última afecta los pequeños vasos de la retina, los riñones y los nervios periféricos y causa severos daños a los pacientes afectados. En esta revisión se tratan los mecanismos básicos implicados en la microangiopatía, que comprenden la activación de la proteín quinasa C, la formación de los productos finales de la glicosilación avanzada, la reducción de aldosas y el estrés oxidativo. El conocimiento de estos procesos es importante para el diseño de nuevos fármacos que logren prevenir o retrasar el desarrollo de estas complicaciones.

Referencia:
http://www.cocmed.sld.cu/no84/n84rev2.htm

Microarrays en Diabetes Mellitus

 Microarrays proporciona un escenario versátil para la utilización de la información del genoma humano y otros genomas en beneficio de la salud humana, potencialmente ganando una gran cantidad de conocimiento no tiene precio. Esta nueva tecnología permite a los investigadores interactuar miles de genes simultáneamente utilizando un único chip. El proceso utiliza ARNm, que especifica los genes que se expresan, es decir a transcripción inversa en ADNc. Este ADNc entonces hibrida con el complemento de cDNA se encuentra en un portaobjetos de vidrio.Las técnicas más antiguas limitado el investigador, ya que sólo podría poner a prueba un gen por cada experimento. Esto frenó la comprensión de la función de los genes y genomas enteros, por lo que es muy difícil de conseguir información en el campo de la biología molecular. Microarrays son muy nuevo y complejo para correr, y no se entienden completamente. Una gran cantidad de investigación aún se debe completar para comprender los datos que se encuentran utilizando microarrays, sin embargo, las posibilidades podría ser interminable. Los investigadores podrían descubrir rápidamente nuevas vías de enfermedades, descubrir dianas terapéuticas y determinar tratamientos específicos para cada paciente.

El análisis de microarrays de ADN mostraron que CHOP es inducida por IL-1β más IFN-γ, una combinación que aumenta la producción de NO, en rata primaria β-células. NO inducida por la apoptosis a través de la vía de la tensión ER no es una observación especifica en β-celulas, pero se ha demostrado que se producen en deficientes en p53 MG5 células micrigliales, macrofagos peritoneales y células primarias primarias.

Referencia:

http://www.naika.or.jp/im2/42/01/03r.aspx
http://csmbio.csm.jmu.edu/bioweb/Bio480/Spring05/AJgroup2/introduction2.htm

PCR para Diabetes: Marcadores de inflamación y disfunción endotelial en niños con diabetes tipo 1

La diabetes es una enfermedad metabólica asociada a un riesgo mayor de enfermedad vascular prematura y comparte con la ateroesclerosis un fenómeno inflamatorio subclínico.

El fenómeno inflamatorio que tiene lugar durante la fase temprana de la diabetes determina un incremento en los niveles séricos de distintas citoquinas como la interleuquina-1 (IL-1), interleuquina-6 (IL-6) y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), que por vía sanguínea llegan al hígado promoviendo la síntesis de proteínas de fase aguda tales como la PCR y el Fg.

La PCR estimula la expresión endotelial de moléculas de adhesión como E-selectina (E-S), VCAM-1 y molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1), favoreciendo así el desarrollo acelerado de ateroesclerosis.

Referencia:
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0025-76802010000100008

Toma de muestras para técnicas de Biología Molecular de Diabetes. Método ELISA

En los pacientes diabéticos, las células beta que se encuentran en los islotes pancreáticos, son agredidas por células del sistema inmune. Debido a esta agresión, se generan además autoanticuerpos específicos para los componentes moleculares de las propias células beta pancreáticas, productoras de insulina. Estos autoanticuerpos, también denominados “marcadores”, comienzan a reproducirse mucho antes de que la enfermedad se manifieste. El método ELISA desarrollado trabaja mediante la detección de estos marcadores que se encuentran en la sangre, a través de dos autoantígenos recombinantes, algo alterados  respecto de las moléculas naturales, y que se denominan Trx-GAD e IA-2ic.  

Referencias:

http://www.agencia.gov.ar/IMG/pdf/casoagencia_unnuevometododeanalisistipoelisa.pdf